Saya Otonashi: El personaje principal de la historia. Es una quiróptera, hermana mayor de Diva, quien, al hacer que su sangre entre en contacto con la de otros quirópteros, frutos de la sangre de su hermana Diva, puede matarlos instantáneamente. Es por esto que Red Shield (el Escudo Rojo) le da tanta importancia a su seguridad ya que la consideran la última esperanza de la humanidad.

Al igual que Diva, Saya nació en 1833 en Francia, del vientre de un quiróptero encontrado por el primer Joel y por Amshel en Islandia, al cual bautizaron como Saya al pensar que se trataba de una momia. Sin saber que era un quiróptero lo diseccionaron y encontraron en su vientre dos capullos: sin éxito intentaron abrirlos con una navaja y durante esta operación Amshel se cortó el dedo, derramando unas gotas de su sangre en unos de los capullos, el que comenzó a palpitar. Es entonces cuando ambos se dan cuenta que los capullos se alimentaban de sangre humana para poder desarrollarse. Pasaron los meses y cuando los capullos se abrieron nacieron Saya y Diva. Por tratarse de una investigación decidieron separarlas y criarlas en ambientes completamente distintos: mientras que Saya era tratada como una hija por Joel y recibía todo tipo de lujos y comodidades, Diva era tratada como un animal ya que la mayor parte de su vida permaneció encerrada en una torre lejos de la casona que compone el "zoológico" localizado en una campiña a las afueras de Burdeaux, siendo objeto de experimentos bajo los cuidados de Amshel.

A medida que avanzaban los años, Joel y Amshel se dieron cuenta que Saya no envejecía en lo absoluto, y que era capaz de sanar sus heridas muy rápidamente. Es en este tiempo cuando ella conoce a Hagi, quien había sido llevado a la casona como un "esclavo" para verificar si era posible que Saya tuviera hijos. Años más tarde, Hagi se convierte en Caballero de Saya al ingerir la sangre que ella le dio con el fin de salvarlo de morir luego de que cayera de un barranco.

Red Shield conoce todo sobre ella gracias a un diario que el primer Joel Goldschmidt llevaba, al que llaman "El diario de Joel". En la batalla final con Diva, después de morir ésta, Hagi le declara su amor a Saya, correspondiendo ella al beso (dándose a entender que ella también estaba enamorada de él), pero algunos momentos después él es aplastado por un derrumbe del techo del teatro, mientras luchaba contra Amshel. Saya debe dormir por 30 años después de un periodo corto de actividad. En el capítulo final ella vuelve a quedarse dormida. Tiempo después, en el lugar donde está descansando aparece una rosa rosada con un lazo azul sujeto en ella; este lazo era el que solía usar Hagi en el pelo, lo que Kai reconoció. También dos de los caballeros de Diva se enamoraron de ella Solomon y Karl.

Diva: La hermana gemela de Saya.Tiene 5 caballeros: Amshel Goldschmidt, Solomon Goldsmith (a quien Diva consideró traidor al enamorarse de su hermana), James Sidelside, Karl Fion y Nathan Mahler. Aparentemente una chica dulce, encantadora y feliz, pero en realidad es una chica cuya diversión es el sufrimiento de los demás, con sed de sangre y una mentalidad perversa. Esto es debido a que permaneció gtan parte de su vida encerrada en una torre en el "zoológico" (donde se encontraban diversas especies animales considerando también a Saya y Diva) por Joel y Amshel quienes la investigaban y le suministraba una pequeña porción de alimento.Este trato hizo que Diva odie la existencia de los humanos; empeorando las cosas el saber que Saya, su hermana, recibía todo el amor de Joel considerándolo así como su padre y desconociendo la existencia de su hermana. Cuando Saya descubre a su hermana decide nombrarla "Diva" por su hermosa voz y la visita en ocasionaes; en una de esas visitas decide liberarla para dar una sorpresa a Joel que en ese instante estaba cumpliendo sus 72 años de vida, pero esto ocasiona la venganza de Diva contra todos los presentes en dicha fiesta siendo la última vez que se le ve.

Vuelve a hacer su aparición nuevamente en el "zoológico" causando así las dudas y sufrimientos de Saya; cuando Riku se vuelve caballero de Saya(luego que Diva estuviera apunto de matarlo al sucionarle su sangre) es perseguido por Diva hasta los cuarteles de Red Shield, y cuando lo encuentra se aprovecha de sus miedos y abusa sexualmente de él. La sangre de Saya o Diva al hacer contacto una con la otra se cristaliza, es por esta razón que Riku muere en cuanto Diva queda embarazada de dos pequeñas que son la futura generación de quiropteros (esta era la obsesión de Amshel para extinguir la raza humana y crear una nueva generación como se puede mostrar al final de la serie).

También le ofrece a Kai que fuese su caballero ya que ella cree que con esto conseguiría ser más amada lo cual explica el gran numero de caballeros que posee. Ella muere, pues cuando concibió a sus hijas su sangre perdió el efecto y se cristalizó luego de que la espada de Saya la penetrara. Murió con una vision en su mente de lo que abría sido el futuro con sus hijas, comprendiendo en ese momento el deseo de Saya de proteger a quienes ama. Nathan afirma después de la pelea que lo único que ella quería era ser amada. En el capítulo final (50) aparecen las hijas de Diva ya con una edad aparente de 5 años, y se muestra que fueron criadas por Kai quien se considera su padre.

Nunca se vio a Diva con un arma que utilizase, ya que hacía que sus caballeros pelearan por ella. Sólo a finales de la serie se la ve con una espada para defenderse e intentar matar a su hermana.

Hagi: Un quiróptero, el primer Caballero de Saya, quien la ha acompañado y protegido durante toda su vida. Joel lo llevó (lo compró, así que podría decirse que era un 'esclavo') para que fuera su compañero (se pretendía que fuera el "novio" de Saya para ver si podía reproducirse) cuando Hagi era aun un niño y aunque al principio ellos dos no se llevaban bien (Hagi era muy orgulloso y obstinado y Saya lo trataba como un sirviente) ambos se convirtieron en compañeros de juegos. Con el paso de los años, Hagi se daría cuenta de que Saya no envejece en absoluto y de que tiene una sorprendente capacidad de curación. Hagi se transforma en Caballero de Saya al recibir su sangre tras estar a punto de morir después de caer de un acantilado; desde entonces su tiempo se detiene y adquiere poderes de quiróptero. En el capítulo final, Hagi besa a Saya y le dice que la ama pero desaparece en los escombros del teatro por culpa de Amshel. Tiempo después, cuando Saya esta en su periodo de hibernacion, se ve frente a donde ella duerme una rosa rosada como la que Hagi solía darle cuando vivían juntos en el Zoológico, con la cinta azul que él usa en el cabello; esto nos da a entender que Hagi está vivo. Los poderes de quiróptero de Hagi permanecen reprimidos luego de un ataque al zoológico en 1867, donde al sentir miedo de que hirieran a Saya, este mata a todos aquellos que se le acercan. En Vietnam cuando Saya es despertada con su sangre y entra en un trance, ella corta un brazo de Hagi y es por eso que siempre permanece vendado. Entre sus habilidades como quiróptero están sus alas (que muestra casi al final de la serie y que no se atrevió a mostrar porque no quería que Saya volviera a poner la cara de temor que puso él cuando mató humanos para defenderla) y su brazo que permanece vendado (casi al final de la serie termina usando sus dos brazos para pelear), además tiene un estuche de cello que usa como escudo, arma y para guardar la espada de Saya.

Kai Miyagusuku: Hermano de Saya (aunque no comparten lazos sanguíneos) e hijo adoptivo de George. Al parecer ama a Saya más que como a una hermana; incluso en el capítulo 46 Mao le pregunta si ya le declaró su amor a Saya, a lo cual él le responde que no se meta en su vida personal. Al final nunca le confiesa a Saya sus sentimientos. Con el paso del tiempo comienza a descubrir lo que en realidad está pasando y termina por unirse a Red Shield en su lucha contra Diva y sus Caballeros. Tras la muerte de Riku, Kai recoge un pedazo cristalizado de él y lo pone en un collar que siempre lleva consigo. En el capítulo final él carga a Saya y la lleva hacia donde va a dormir nuevamente, al mismo momento que llora. Se encarga de cuidar a las hijas de Diva.

Riku Miyagusuku: Hermano de Kai y Saya e hijo adoptivo de George quien en una situación de vida o muerte por culpa de Diva, termina por convertirse en un Caballero de su propia hermana, aunque después de algunos días es asesinado por Diva mientras estaban en el barco de Red Shield, y ésta después toma su apariencia. Ésta es la razón de que, en la versión japonesa, Riku y Diva son interpretados por la misma persona, Akiko Yajima. Es el padre de las hijas de Diva.

George Miyagusuku: Perdió a su esposa e hija en un accidente, luego adopta a Kai y Riku, que perdieron a sus padres; y a Saya cuando ésta despierta. Es convertido en quiróptero pero le pide a Saya que lo mate como su padre y como humano que era y esta, aunque se negaba al principio, finalmente accede. La frase que siempre decía a sus hijos adoptivos era NANKURUNAISA: "Vive hoy por el bien del mañana".

David: Uno de los cabecillas de Red Shield, encargado de comandar las operaciones de esta organización, además es el hijo del David que le pidió a George que cuide a Saya hasta que despierte. Es el que tiene a su cargo a Saya. Esta dentro de Red Shield después de que su padre es asesinado por un quiróptero. Está enamorado de Julia (aunque no sea muy demostrativo) y en el último capítulo se les ve juntos y a ella embarazada.

Lewis: La mano derecha de David, un ex-agente de la CIA que se unió a Red Shield, es gracias a su antiguo trabajo que logra conseguir informacion sobre lo que trama el ejercito estadounidense.

Julia Silverstain: Científica encargada de toda la investigación de ese campo para Red Shield, además era la principal asistente del Doctor Colins (este último trataría de asesinarla pero es salvada por David), ella se une al estudio de Diva, finalmente termina regresando a Red Shield porque David se lo pide. Está enamorada de David. En el último capítulo se la ve embarazada de él.

Joel Goldshmidt:: El primer Joel. Hermano de Amshel, fue uno de los que encontró y crió a Saya. A Diva se la encerró, privada de contacto humano; por ordenes de Amshel para poder ser estudiada, y Saya fue criada con cariño como una hija. Joel muere asesinado por Diva la noche de su cumpleaños, después de ser liberada por Saya, que quería que acudiera a la celebración para darle una sorpresa.

Joel Goldshmidt: Líder de Red Shield quien posee gran información sobre la historia de los quirópteros. Su nombre es el mismo que el Joel original como muestra de su herencia y su compromiso de solucionar los problemas ocasionados por las acciones de su antecesor.

Akihiro Okamura: Reportero que tras encontrar algunas fotografías tomadas por su padre comienza a investigar. Pronto se ve envuelto con Mao y tras seguir algunas pistas se encuentran con Red Shield y se entera de toda la verdad (esto pasa en los capítulos 32-33). En el 50, en una conversación de Saya y Kai, se dice que Akihiro y Mao saldrán juntos del país.

Mao Yahana: una estudiante, enamorada de Kai, pero sabe que a él le gusta Saya, viaja con Okamura con el único propósito de encontrar a Kai, pero al final viaja con Okamura por su voluntad. Aunque en principios sentía celos de Saya, en los capítulos finales, Mao se muestra comprensiva y amistosa con ella. Luego de que Mao escuchara inconcientemente una conversación entre Hagi y Saya, ésta última le confiesa que pronto volverá a dormir.

Van Argiano: Subordinado de los Caballeros de Diva, se encarga de la dirección de algunos proyectos de Cinq Flèches (Las Cinco Flechas), incluido el proyecto de los 'Corpse Corps', en el ultimo episodio es arrestado.

Amshel Goldsmit: Caballero de Diva. Cree que Saya cometió un error al liberar a Diva, ya que si no, Diva hubiera sido toda para él. Muere en el último capítulo, cuando Hagi le clava la espada de Saya en el pecho.`Tenia una enorme obsesión por Diva y la veía como un conejillo de indía (según Neithan)

Solomon Goldsmit: Para algunos el mejor caballero de Diva, pero, claro, la traiciona e incluso intenta matarla tras enamorarse de Saya. Incluso le pide a Saya que sea su novia y que recorran el mundo juntos. Antes de convertirse en Caballero, después de la I Guerra Mundial; él era un médico. Era el Caballero favorito de Diva. Muere después de la ultima batalla con James, cuando accidentalmente la espada de Saya le roza parte del pecho, una verdadera tragedia porque Solomon estaba cerca de conquistar a Saya y le dice que quería ser su caballero solo por amor y no por la sangre.

Karl: Un Caballero de Diva que se enamoró de Saya al conocerla en la guerra de Vietnam. Se convirtió en Caballero por uno de los experimentos de Amshel, el cual pretendía convertir una persona asiática en un Caballero para investigar acerca de esta especie. Ya que Diva nunca lo amó, él creyó que él y Saya podrían estar juntos porque estaban solos. Muere cuando, desobedeciendo las órdenes de proteger a Diva, huye con algunos Corpse Corps e intenta matar a Saya con ellos en un intento desesperado de morir con ella.

James: Caballero de Diva que en su forma de quiróptero adquiere una piel extremadamente rígida que incluso puede detener balas sin verse afectada. Aunque todos los Caballeros son leales y aman a su reina, en el caso de James podríamos decir que es quien más lo demuestra. Después de su primera batalla con Saya pierde varias partes de su cuerpo y estas son reemplazadas con partes de Corpse Corps. Debido a estos implantes, Diva deja de quererlo. Muere cuando los "estigmas" aparecen en él, en el episodio 45 este revela que ni la sangre de Diva puede salvar de la maldición de las "estigmas". Lulu (la Sif) creía que eran Moses y Karman quienes los estaban protegiendo, dándole a Saya la oportunidad perfecta de dar el golpe final.

Nathan Mahler: El último Caballero de Diva cuyos pocos y breves combates demuestran que tiene un enorme poder, incluso temido por los otros Caballeros, sobre todo Amshel. No parece preocuparse tanto por el combate como por la faceta artística de Diva. Es entre los fans el Caballero más polémico y se ha elaborado una interesante teoría sobre él, y es que él podría ser uno de los Caballeros de la madre de Saya y Diva, inquietud que él mismo menciona al propio Amshel. Deja que Saya lo mate después de que Diva muere, ya que no ve ninguna razón para estar vivo (sin embargo nunca se vio que Nathan se cristalizara, como el resto de sus hermanos al ser atacados con la sangre de Saya). En el ultimo episodio se ve a Nathan como un reportero, pero después desaparece.

Gregory: Aparece como uno de los Caballeros de Diva en el episodio 17, cuando Saya recuerda cuando ella y Hagi fueron anteriormente a Rusia. Haciéndose pasar por una niña de la edad de Saya (Sonya) logra burlarlos y los invita a su casa. Revela su identidad cuando una señora la derriba con una hacha y Sonya la mata. Su forma de Caballero es un monstruo de color marrón con alas y dos cuernos mirando hacia el frente. Muere tratando de matar a Saya, cuando ésta le clava su espada en la cara, mientras Amshel escapa con Diva.

Moses: Líder ideológico del grupo Sif (en la traducción al español se les conoce como "La Gentuza"). Morirá junto a su amigo Karman mientras contemplan al atardecer, aunque él no mostraba síntomas de tener estigmas, se suicidó para acompañar en todo momento a su amigo, con la esperanza de que Lulu pueda vivir y agradeciendo a Kai su amistad. Quería que se le recordara, y a todos sus compañeros.

Karman: Uno de los miembros de los Sif (en la traducción al español se les conoce como "La Gentuza"). Desconfía de los humanos y de cualquiera que no sea un Sif, extremadamente belicoso e iracundo. No obstante, gracias sobre todo a Kai y al comportamiento de sus aliados, logrará aceptar la alianza. Morirá junto a su amigo Moses, mientras miran el atardecer, siendo consumidos, para evitar la muerte por el efecto de los estigmas.

Lulu: _Una Sif que acaba siendo amiga de Saya, de su familia y de los miembros de Red Shield. Pese a ser sólo una niña, es tan letal como cualquiera de sus compañeros Sif. Es la única Sif que sobrevive. En el último capítulo, Lulu se va a vivir con Saya a Okinawa.

Irene: Una Sif que se hace muy amiga de Kai, después de que intercambiaran algunas palabras cuando se conocieron en la ciudad de París. Ella genera un nuevo pensamiento en sus compañeros: el de ser recordados antes de morir. Esto logra en un futuro la alianza entre los Sif y el Escudo Rojo. Finalmente, y pese a que Saya le cede su sangre, muere debido a que ellos fueron construidos con la sangre de Diva; por lo tanto la sangre que ellos necesitan para sobrevivir es la de Diva, aunque en el episodio 45 se da a saber que la sangre de Diva tampoco los puede salvar. La sangre de Saya es tan mortal para ellos como la espina, una enfermedad letal.

Gee: Un Sif que muere en el capítulo 21. Él piensa que los Sif son criaturas pecadoras que solo viven hiriendo a otros, muere chupando la sangre de Hagi al creer que la sangre del caballero de Saya podría deshacer la marca (así la llaman). Su mayor deseo era vivir normal caminando bajo la plácida luz del sol.

Kaori: Es la mejor amiga de Saya en la escuela quien confía plenamente en ella.

Collins: Inicialmente se desempeñaba como investigador de Red Shield, es encomendado por Joel para trabajar en investigaciones con Julia, muestra gran interés en el nucleótido D aislado por Julia de la sangre de Riku transformado en caballero, traiciona a Red Shield y se lleva Julia con él para trabajar con Van Argeano, celoso de que Amshel apreciara más a Julia decide matarla pero David interviene a tiempo impidiendo el crimen, ambos salen heridos.

Red Shield (Escudo Rojo)
Organización formada para combatir a los quirópteros, Red Shield fue fundada por los descendientes de Joel Goldschmidt, el hombre que originalmente halló a Saya y a Diva y desató la amenaza quiróptera en el mundo. La mayoría de los miembros de Red Shield es sobreviviente de ataques de quirópteros. El principal enemigo de Red Shield es Diva. Son los encargados de asegurar la protección y el bienestar de Saya.

Grupo Cinq Flèches (Cinco Flechas)
Los Goldsmith son una rama de la familia Golshmidt dedicada a la protección de Diva; todos los miembros de la familia son Caballeros de Diva. Ellos controlan al grupo Cinq Flèches, un conglomerado poderoso e influyente, cuya meta final es crear un mundo de quirópteros para el futuro de Diva.

Los Sif (La Gentuza)
Un balance inestable entre los quirópteros y los Caballeros, son los prototipos de los Corpse Corps (Armada Zombi), soldados pseudo-Caballeros creados por un grupo de científicos dirigidos por Boris bajo el patrocinio de Amshel Goldsmith en Khirbet. Tienen habilidades de regeneración similares, gran agilidad, fuerza sobrehumana, y pueden acabar fácilmente con quirópteros comunes, dado que fueron entrenados para luchar contra ellos mientras estaban en cautiverio. Finalmente, cansados de ser sujetos a toda clase de experimentos, deciden escapar. Los Sif morirán eventualmente a causa de lo que ellos llaman “estigmas”, por las cuales sus cuerpos se cristalizan eventualmente. Como seres imperfectos, los Sif deben evitar el contacto directo con la luz solar o de otra forma sus cuerpos arderán en una llama verde. Al no poder obtener la sangre de Diva (La supuesta única cura para los “estigmas”) irán muriendo gradualmente; Lulu es la única Sif que sobrevive hasta el fin del anime.

Los Corpse Corps (Armada zombie)
Ellos son la base final de los Siff, fueron creados por el mismo grupo de científicos que estos últimos y patrocinados por Amshel Goldsmith. Su fuerza y velocidad son mayores a la de los Siff e igualmente vulnerables a la sangre de Saya. Los Corpse Corps tienen la misma estructura física que Moses (líder ideológico de los Siff)y utilizan espadas para luchar. Fueron creados para sobrevivir 7 días pero su plazo de vida puede alargarse dependiendo de su situaión y con ayuda de la sangre con la que fueron creados. En el capítulo en que aparecen por primera vez, Julia, se plantea si éstos tienen algún sentimiento o emoción.

Existen tres mangas que se posicionan en distintos aspectos y tiempos de la historia de Blood+, todos editados en distintas publicaciones de la editorial Kadokawa Shoten y realizados por distintos autores: